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細(xì)胞分離液分離純化細(xì)胞操作
點(diǎn)擊次數(shù):3315 更新時(shí)間:2018-05-24
   細(xì)胞分離液分離純化細(xì)胞操作
  
  細(xì)胞分離液欄目主要提供淋巴細(xì)胞分離液、ficoll分離液以及多種細(xì)胞分離液試劑盒產(chǎn)品。
  
  細(xì)胞分離液原理:
  
  細(xì)胞分離液是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低(<20mosm/kgH2O),粘度也很小,可形成高達(dá)1.3g/ml密度,采用預(yù)先形成的密度梯度時(shí)可在低離心力(200~1000g)于數(shù)分至數(shù)十分鐘內(nèi)達(dá)到滿意的細(xì)胞分離結(jié)果。由于Percoll擴(kuò)散常數(shù)低,所形成的梯度十分穩(wěn)定。此外,Percoll不穿透生物膜,對細(xì)胞無毒害,因此廣泛用于分離細(xì)胞、亞細(xì)胞成分、細(xì)菌及病毒,還可將受損細(xì)胞及其碎片與完好的活細(xì)胞分離。
  
  細(xì)胞分離液分離純化細(xì)胞舉例
  
  1.富含NK活性大顆粒淋巴細(xì)胞(LGL)的純化:按順序由下向上逐層加50%、47.5%、45%、42.5%和40%五種不同密度的Percoll,如用10ml試管(或塑料管)分離,每層Percoll約1.2~1.5ml,初步從外周血中分離的PBMC細(xì)胞1×108懸于1ml培基中,按要求裝樣、離心和取樣。一般富含NK殺傷活性的LGL細(xì)胞位于42.5%與45%Percoll界面以及上下二層的Percoll液中。
  
  2.純化淋巴母細(xì)胞和除去死細(xì)胞:分別疊加50%和30%Percoll液。收取經(jīng)PHA(或其它抗原、有絲分裂原)刺激PBMC,或含有較高比例異型的PBMC(如腎綜合征出血熱患者),按要求裝樣、離心和取樣。位于管底的淋巴細(xì)胞為小淋巴細(xì)胞;兩層Percoll之間為淋巴母細(xì)胞,純度和回收率在80%以上,位于30%Percoll表面是死細(xì)胞。收獲淋巴母細(xì)胞可進(jìn)行表型、結(jié)構(gòu)以及功能的研究。
  
  

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